一、 細胞樣本請先上過分析儀確定細胞純度及螢光強度再行預約Sorting。
二、 塞機頻率:為保持sorting品質及效率若於上機的前20mins出現塞機狀況,則退回sample。
三、 Sample preparation:
- 細胞樣本嚴格要求細胞為單顆存在,不能有細胞團塊,否則會造成儀器塞機,無法進行細胞分選。
- 每管細胞樣本可經由 BD Falcon REF352235 tube 至少過濾兩次,依細胞黏稠度可增加過濾次數。
- 細胞濃度在 Vantage 要求為1x107/ml,AriaII SORP則為2x107/ml,若細胞較黏稠者,請視情況稀釋濃度(約6x106/ml)。
- 請必須準備無螢光染色細胞作為 negative control 及各別單一螢光染色細胞作為pasitive control,調整儀器設定使用。
Cell sorting 提出申請步驟:新增 user 請填寫申請表格,PI簽名。
Check list:user需提供的資料
- 細胞存活率百分比(viability)
- 勾選欲分選各個細胞群純度百分比(population): 最多可同時sorting四個sub-population,以百分比最低者決定時間長短
- 輸入欲回收族群的number、理想及最低可接受細胞數
- 所需螢光顏色
預約時間之估算:
分選前依細胞存活率(%)及欲分選之細胞純度(%)推估cell sorting時間
例:以上樣流速為1x104/sec為基準,若欲回收細胞數為1x106之時間估算。 欲回收細胞數1x106 / (上樣流速10000 x 細胞分選前純度% x 細胞存活率%) = 所需時間(sec)
有任何問題請聯絡儀器管理人員